家兔人工授精技术

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1  采精方法

    采精是对家兔人工授精的首要一环。下面就手握假阴道采精和授精方法介绍如下:

1.1  假阴道的制作:用直径5cm左右，长度8cm左右的硬塑料管一支，把两端锉光，内装与塑管内径相仿的软海绵一块，将海绵沿直轴方向打一小孔，孔径为0.5cm，孔口呈伞形。集精装可用大号避孕套代替。

1.2  采精前的器械准备:将洗净、消毒过的避孕套松开，装入假阴道内胎中，使开口的一端翻转，固定在外壳边缘，有囊的一端露出内胎的另一端约1cm，注入50～60℃的温水中，使海绵吸收，用温度计蘸取生理盐水或液石蜡，插入假阴道内4cm处测温。当降至43℃左右时即可采精。测温时要注意外界条件，如气温低、降温快，内胎温度高些；反之可低些。对公兔采精每ld仅采一次，如果两次，第二次的精子则不成熟。

1.3  采精:采精的地点可在公兔笼内，左手拿一只母兔诱情，待公兔"爬背"时，右手呈43°角持假阴道放在母兔后腿中间，待公兔射精后，立即将假阴道孔口朝上，以防精液流失。

1.4  假阴道泣度对采精效果有直接影响。公兔阴茎对温度极为敏感，低于40℃不易引起射精；过高温度采精会养成嗜高温的坏习惯，对精液品质也有影响。由于母兔的正常体温在39～4O.5℃之间，因此，假阴道温度以40～42℃之间为宜。

2  精液的检查与稀释

2.1  精液的检查

2.1.1  外观检查:正常公兔的精液呈淡乳白色，具有特殊的腥味，也有少数兔子的精液不正常，混入尿液的色黄有臭味;生殖器有炎症出血的带红色;清水样的为无精子。兔子的精量很少，一般在0.2～2mL之间，平均为0.8mL。在实际应用中，一般以目测估计。

2.1.2  显微镜检查:主要是精子密度的检查和活力的评定。精子密度是指单位容积内所含有的精子数目。精子数的计算，直接关系到授精剂量中含有活精子数。在实践中常用目测法。目测法是根据精子在视野中分布的概况，即精子与精子之间的距离评定为"密"、"中"、"稀"三种等级。这种方法虽是主观评定，但简便易行，实际工作中多采用此法。家兔的精子密度随季节变化也十分明显。

    精子活力是指精液中直线前进运动精子所占百分率。标记"0.9""0.8""0.7……"，分别代表90%、80%、70%……的精子具有前进运动力。这是一种主观评定法，有经验的技术员估计的结果往往很接近实际数。兔子的精子活力应在0.5级以上方可用于授精。如在0.5级以下则受精率很低。不同季节的精子活力差异也十分明显，9至10月平均活力仅0.15级;12月至次年2月平均活力0.51级;3至5月平均活力0.61级。

2.2  精液的稀释

    精液稀释的目的首先是为了扩大精液量，增加输精母兔只数，同时也是为了延长精子存活时间。在配制稀释保存液时应当考虑下列因素。

2.2.1  营养成分:精子在代谢过程中主要是单方面的分解作用。成熟的精子不能通过同化作用将外界物质变成本身的成分。因此为了补充精子的能量消耗，只有用最简单的营养物质，目前常用的是:果糖、山梨醇、甘油磷酸胆碱(GPC)和磷脂。

2.2.2 保护成分。缓冲物质――为了保持精液适当的pH值，常用柠檬酸钠、酒石酸钾钠、磷酸二氢钾和磷酸氢二钠等。防冷击保护剂――常用的有卵磷脂、卵黄、蛋白陈、乳类。制菌物质――常用青霉素(每lmL稀释液加入500～1000单位)、链霉素(每lmL稀释液加人500～1000μg)。

    家兔精子的理想稀释液广泛应用的是0.9%的氯化钠或5%的葡萄糖溶液，稀释倍数一般为9倍。稀释时稀释液的温度应与精液等温。稀释液注大集精瓶(袋)的速度不能过快。注入后再用玻璃棒轻轻搅动，使其均匀混合。稀释后的精液应作一次显微镜检查，发现活力不强或死亡过多的精子则不能用作输精。

3  输精方法

    输精就是将精液注入母兔的生殖道内，是人工授精的最后一环。

3.1  输精器:可用玻璃输精器，前端长l0cm左右的空心小玻管与2mL注射器相连，也可用实验用滴管代替，每输精一次应更换一支无菌输精器。

3.2  输耕母兔的选择:应选择健康无病，处于发情期的母兔进行授精，这对提高受胎率有很大益处。

3.3  刺激母兔排卵:母兔发情后，如无交配或其它蕴含物刺激则不会排卵。人工授精缺乏交配的刺激性。然而对母兔注射促排卵素3号却有较好的促排卵效果，每只兔注射0.5μg，母兔输精前后注射都同样有效。

3.4  输精:由助手抓住母兔的背部，使母兔臀部略朝上，输精员持输精器(如一人操作可一手抓兔，一手持输精器)。取经过稀释的精液O.5mL(约含精子1000万个以上)慢慢插入母兔阴道内约6～7cm处即可输精。输精器及精液必须加温至与兔子体温相接近，输精前可放在35℃的温水中保温。插入时应轻轻向前上方旋动，要边旋边进，切不可硬插，以免损伤生殖道。插入后可来回轻轻抽动和转动几次，有助于刺激子宫颈。抽出输精器时也应慢慢地边转动边抽出，以防精液随输精器溢出。抽出输精器后，即由助手拍打一下兔子的臀部，使母兔受惊，以便精子吸人。

    每次输稀释过的精液需0.8mL，一只种公兔的精子稀释后可输入10只母兔。整个人工授精过程要求动作准确，无菌操作。

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